Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现不止人形体内自身抗形体到显现不止1型式肝炎诊断症状的重大突破率在青极多年里面后期就有很差的所述，多个人形体内自身抗形体乙型式肝炎的青极多年除此以外70%在血清匹配后10年内患上肝炎，而随访15年的青极多年这一比重上升到84%。相对来说之下，占诊断1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的复发的系统还未得不到应有的数据分析方法。

越来越多的人开始应用于分期系统来表述1型式肝炎的重大突破：个形体在显现不止多种人形体内自身抗形体时重回第1阶段，显现不止血糖极其时重回第2阶段，显现不止症状时重回第3阶段。一些多发人形体内自身抗形体乙型式肝炎的个形体，在1期和2期，重大突破较极快，并发展为复发的1型式肝炎。我们之前所述了一第一个大在首次监测到多种人形体内自身抗形体样本后至极多10年无肝炎的极极快重大突破者，这第一个大病变人数极多，但外观上极为说明。随后，我们发现人形体内自身复合物免疫CD8+T细胞膜底物在重大突破较快的病变里面基本不共存，但在近来复发和近十年共存的肝炎病变里面很容易监测到。这可能会表明，与重大突破病变相对来说，这些病变致病的恒定大幅提高。

早期数据分析方法表明，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数量长时间，但肝炎病变共存一些功能性缺陷，其里面最主要对IL-2的底物并能降低。此外，肝炎病变里面的不稳定性CD4+T细胞膜可能会对恒定更具抵抗性，显出为不稳定性T细胞膜的可抑制移向，纯净导致的Treg和形体外导致的诱导Treg，以及复合物随之而来的CD4+T细胞膜里面IL-2底物移向。本数据分析方法的旨在是所述了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在领头极较快重大突破者里面的外观上，他们的比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法方法：BOX数据分析方法是一项以人群为基础的平行数据分析方法，在21岁以下确诊的病变亲族里面检查1型式肝炎的险恶因素。我们之前所述了近十年较快重大突破者的外观上，他们维持多重人形体内自身抗形体乙型式肝炎超过10年，但未显现不止肝炎的诊断症状，极快性或非顺利完成性免疫。随后，10名在此期间维持无肝炎并乐意发放大量肾脏样本的较快重大突破者纳入T和B细胞膜功能性分析方法。在目前的数据分析方法里面，8名极快重大突破者(SP第一个大)，里面位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的人形体内自身抗形体乙型式肝炎。所有的自发性都正处于1型式肝炎重大突破的1期，尽管一些人随后失去了人形体内自身抗形体对某些复合物的乙型式肝炎底物，然而，一名病变已经正处于2期至极多6年，但未显现不止诊断症状，一名病变被诊断为肝炎，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里面对该供形体顺利完成了直接指标。分开外周血单个氘细胞膜(PBMCs)，运用于多参数流式细胞膜妖术和T细胞膜可抑制次测试指标供形体里面Treg的kHz、免疫和功能性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无监督聚类分析方法，指标Treg免疫。

结果：与身心健康供形体相对来说，来自极快重大突破形体的清醒CD4+T细胞膜的监督聚类推断，启动时着的清醒CD4+ TregkHz上升，与糖皮质激素诱导的TNFR系统性蛋白质(GITR)表述上升有关。一名HbA1c下降的病变与重大突破较快者和匹配的对照第一个大相对来说，Treg谱有所各不相同。功能性分析方法表明，与身心健康供形体相对来说，来自较快重大突破形体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞膜可抑制明显受到破坏。显出为对不稳定性CD4+T细胞膜CD25和CD134表述的可抑制上升。

所示1 深入的免疫分析方法推断，CD4+Treg免疫球蛋白质在极快重大突破配置文件里面上升。由FlowSOM填充的Treg过道，聚集在来自所有供形体的活着CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标上物表述鉴定不止10个元簇:清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)应用于9个各不相同Treg标上填充的10个元簇的MST。每个链表都是一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表第一个大外面上色。每个链表里面的糕点所示说明单个标上的表述行政级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整形体标上表述。(c, d)为HD第一个大(c)和SP第一个大(d)填充所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster箱内直通所示(重元素> 0.05%)确定为HD和SP第一个大:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞膜(l)。浅蓝色白点都是ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模型式证实，TregkHz的上升是重大突破较快的标志。AO门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比起SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的都是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成分开，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑斑)和SP(白斑)第一个大以及供形体SP 606(浅蓝色)里面CD25+ cd127的kHz概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱内直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度制做，箭头突不止的簇被辨别为SP和HD配置文件密切关系的各不相同。(j)箱内直通所示推断了在SP(白斑)和HD(灰点)第一个大里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(比重)。(k)概率分布推断每个簇的免疫(黄色)和Treg标上相对来说表述与背景表述(金色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇里面标上的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

所示3 与身心健康献血者相对来说，重大突破较快者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T细胞膜元簇(清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表述标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，推断概率分布(c)和概要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(浅蓝色)所有供形体最主要，p< 0.05(金色)供形体SP 606和匹配的HD不最主要在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表述，从AO门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)串联，推断概率分布(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

所示4 来自较快重大突破的CD4+ treg细胞膜控制不稳定性CD4+T细胞膜的并能降低。SP第一个大用金色的直通和白点说明，HD第一个大用黄色的直通和白点说明，浅蓝色的直通/白点说明供形体sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠活着化细胞膜，培植3天后顺利完成流式细胞膜妖术监测。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培植(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE可抑制多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制多于。应用于乙型式肝炎对照(启动时着的自发细胞膜分别为treg)计算可抑制多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞膜对较快重大突破的T细胞膜活着化的可抑制更敏感。SP第一个大用金色的直通和白点说明，HD第一个大用黄色的直通和白点说明，浅蓝色的直通/白点说明供形体sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠活着化细胞膜，培植3天后顺利完成流式细胞膜妖术(CD25反染)和细胞膜因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里面的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们证明了的结论是，来自较快重大突破子的活着化清醒CD4+Treg在GITR表述里面得不到了引入和比起丰富，强调了实质性数据分析方法Treg在1型式肝炎风险个形体里面的差异性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28